Page 13 Volume 11, Número 2, 2003

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reconhece os receptores NK1 enquanto na ou-
tra série se usava um anticorpo contra os re-
ceptores GABA . A revelação dos receptores
B
NK1 e GABA foi feita de modo semelhante, isto
B
é, usando um anticorpo secundário biotinilado,
seguido de um fluorocromo que, quando exci-
tado em microscópio de fluorescência, emite
radiação com 617 nm por neurónios imunoreac-
tivos para os receptores NK1 ou GABA pelo
B
que estes apareciam com a cor vermelha. Em
cada imunorreacção dupla, ou seja Fos + NK1
ou Fos + GABA foram examinados 15 cortes,
B
aleatoriamente seleccionados, usando um mi-
croscópio de fluorescência que fazia secciona-
mento óptico (microscópio confocal). No corno
dorsal da medula espinhal (lâminas I a V), Figura 1. Microfotografias de fluorescência mostrando
contaram-se todos os neurónios imunorreactivos o mesmo neurónio (setas) triplamente marcado para os
receptores NK1 (A), GABA (B) e proteína Fos.
para a proteína Fos, para cada um dos recepto- B
res e duplamente marcados para a proteína Fos
e para cada um dos receptores. Usou-se o • • •
2
teste de X corrigido para comparações múlti- • � • • � • I
plas para comparar as percentagens de neuró- •
nios que exibiam imunorreacção simultânea • II
para a proteína Fos e para o receptor NK1 com • III
os que possuíam reacção para a proteína Fos e �
para os receptores GABA . �
B
Na reacção imunocitoquímica tripla usámos � IV-V
um protocolo similar ao anteriormente descrito �
mas utilizámos 3 fluorocromos que conferiam �
uma cor distinta à proteína Fos, aos receptores � �
NK1 e aos receptores GABA . Para o efeito, a
B
proteína Fos foi revelada por um anticorpo de-
tectado por fluorocromo que emite a 688 nm,
sendo observada com a cor azul. Os cortes
foram de seguida, incubados em anticorpo con- Figura 2. Distribuição dos receptores NK1 (círculos) e
tra os receptores NK1 e revelados com o fluo- GABA (triângulos) no corno dorsal da medula
B
rocromo que emite na gama do verde. Para os espinhal. Cada símbolo representa 10 neurónios que
exprimem o respectivo receptor.
receptores GABA usou-se o fluorocromo que
B
emite na radiação vermelha. Foram contados,
em 15 cortes da medula escolhidos ao acaso, A expressão da proteína Fos era detectada
os neurónios imunorreagidos para cada um dos pela presença de núcleos de contornos bem
receptores, para a proteína Fos ou triplamente definidos onde ocasionalmente sobressaíam os
marcados. As percentagens de neurónios que nucléolos (Fig. 1C). Estes distribuíam-se diferen-
co-localizavam os receptores NK1 e os recepto- cialmente nas várias lâminas do corno dorsal da
res GABA foi comparada consoante as células medula espinhal, predominando na lâmina I
B
continham ou não a reacção para a proteína Fos. (45%), seguindo-se a lâmina II (33%), a lâmina
IV-V (15%) e por último a lâmina III (7%). Esta
Resultados distribuição diferencial da proteína Fos está de
acordo com os dados de estudos previamente
Os receptores NK1 e GABA ocorriam em publicados usando o mesmo protocolo de es-
B
pericários e fibras dispersos na substância cin- timulação dolorosa (Lima, et al., 1993; Tavares,
zenta da medula espinhal (Fig. 1A e 1B) mas a et al., 1993, 1995).
quantificação restringiu-se aos pericários que Os neurónios duplamente marcados para um
ocorriam no corno dorsal (Fig. 2). A maioria dos dos receptores e para a proteína Fos encontra-
pericários com reacção imunocitoquímica para vam-se predominantemente na lâmina I quer
os receptores NK1 ocorria na lâmina I (75%) nos receptores NK1 (81%) quer nos GABA B
enquanto os valores nas lâminas II, III e IV-V (73%). A proporção de neurónios com recepto-
eram semelhantes (cerca de 8% em cada). Os res NK1 que também era imunorreactiva para a
pericários imunorreactivos para os receptores proteína Fos era superior na lâmina I atingindo-
GABA predominavam nas lâminas IV-V (70%), se diferenças estatisticamente significativas quan-
DOR seguidos da lâmina I (21%). Foram observados do se comparavam com a lâmina III (Fig. 3).
B
Relativamente aos receptores GABA , ocorria
poucos neurónios nas lâminas II e III (6 e 3%,
B
12 respectivamente). um predomínio mais acentuado da dupla mar-