Page 17 Volume 11, Número 2, 2003

Dor (2003) 11
gonista específico do VR1. Embora estas expe- Avaliação do efeito nociceptivo da ANA
riências levem a pensar que a ANA seja um
agonista endógeno do VR1, não se pode igno- Os animais foram anestesiados com hidrato
rar que a ANA é também agonista de um outro de cloral 35% (0,1 ml/100 g) e a bexiga foi
receptor abundante no sistema nervoso, o CB1 cateterizada pela uretra, instilando-se durante
(Devane, et al., 1992). Apesar do CB1 ser 30 min, 0,5 ml de soro fisiológico, de ANA 50
expresso em aferentes primários que exprimem µM, ou de ANA + CPZ, ambos a 50 µM. Uma
o VR1 (Ahluwalia, et al., 2000), a sua estimula- hora e meia após o fim da aplicação, os animais
ção por agonistas específicos administrados foram fixados por perfusão transaórtica, com
sistemicamente causa na bexiga um efeito paraformaldeído a 4% e ácido pícrico a 10%. No
oposto ao da estimulação do VR1, isto é, induz final colheu-se a medula espinal, a qual foi pós-
analgesia e hiporreflexia (Farquhar-Smith, et al., fixada durante duas horas no mesmo fixador, e
2002). crioprotegida, durante 24 h, em sacarose a
Perante estes dados decidimos verificar se a 30%. O segmento espinal L6 foi cortado trans-
concentração da ANA varia em bexigas infla- versalmente a 40 micrómetros num micrótomo
madas, se a ANA induz dor e hiperactividade de congelação, sendo cada um em cada qua-
vesical quando aplicada em bexigas normais, tro cortes imunorreagido contra a proteína Fos,
e, no caso de acontecerem, se são alteradas usando o método ABC-HRP. As células imuno-
pela administração simultânea de antagonistas positivas foram contadas em 10 cortes por seg-
específicos do VR1 e do CB1, respectivamente mento.
a CPZ e o SR141716A.
Tratamento estatístico
Materiais e métodos Todo os resultados obtidos nesta experiência
foram analisados com o test t, de distribuição
Utilizaram-se ratos fêmeas Wistar adultas. unicaudal. Valores de p < 0,05 foram conside-
A ciclofosfamida foi adquirida à Baxter, Portu- rados significativos.
gal. O uretano foi adquirido à Sigma, Portugal.
A anandamida e a capsazepina foram adquiri- Resultados
das à Tocris, EUA, e o SR141716A à SRI Inter-
national, EUA. Quantificação da anandamida
O resultado da análise por espectrometria de
Quantificação da anandamida massa mostrou que as bexigas dos ratos injecta-
Com o intuito de se avaliar qual a concentra- dos com soro fisiológico continham 32,15 ± 3,35
ção de ANA presente em bexigas inflamadas, pmol ANA/g de peso seco da bexiga. Ao fim das
induziu-se cistite química, injectando intraperi- 4 h após a indução da inflamação os valores de
tonealmente (i.p.) ciclofosfamida, numa dose ANA subiram para 45,01 ± 6,72 (p < 0,05) (Fig. 1).
de 200 mg ciclofosfamida/kg de peso corporal.
Quatro horas depois, os animais foram decapi- Efeito da anandamida no reflexo miccional
tados e as bexigas colhidas e imediatamente A ANA, nas concentrações de 1, 5 e 10 µM,
congeladas a –80 ºC. Utilizou-se, como contro- não influenciou a actividade do reflexo miccio-
lo, bexigas de ratos injectados i.p. com soro nal. Contudo, para valores de concentração
fisiológico. A concentração de ANA foi determi- superiores, ou seja, 50 e 100 µM, o número das
nada por espectrometria de massa. contracções da bexiga por minuto aumentaram

Efeito da anandamida no reflexo miccional
Em animais anestesiados com uretano (1,2 mg/
kg, s.c.), a bexiga foi exposta através de uma
incisão abdominal. Uma agulha de calibre 21 foi
inserida na cúpula e soro fisiológico foi infundi-
do a 6 ml/h, deixando a uretra aberta. A tempe-
ratura corporal foi mantida a 36-37 ºC, através
de um dispositivo termorregulável. Após o perí-
odo de estabilização de 30 min, aplicaram-se
sequencialmente na superfície serosa da bexi-
ga soluções de ANA a 1, 5, 10, 50 e 100 µM em
soro fisiológico, durante 10 min cada. Este
procedimento foi repetido usando-se uma so-
lução de a 50 µM de SR141716A, em simultâ-
neo com cada uma das soluções de ANA. Figura 1. Valores de anandamida, em pmol/g de peso
DOR Aplicou-se ainda, sobre bexigas normais, uma seco da bexiga, presentes nas bexigas de ratos
colhidas 4 h após a injecção i.p. com soro fisiológico
solução de ANA a 50 µM, seguida da aplica-
16 ção de ANA + CPZ, ambas a 50 µM. (SF) e com ciclofosfamida (inflamados).