Page 29 Volume 20 - N2 - 2012

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por um algoritmo de ajuste e por análise de correspondendo cada quadrícula a uma resolução
componentes principais (PC). Foi utilizado ainda de 20 por 20 píxeis no vídeo. A média da taxa de
o software WaveForm Tracker (Plexon Inc., disparo de cada neurónio foi calculada para
Dallas, TX, EUA) para verificar se neurónios re- cada quadrícula dividindo o número de disparos
gistados se mantêm estáveis ao longo das vá- registados pelo tempo passado em cada qua-
rias sessões de registo. Este software assegura drícula. Foram classificados como spatial fields
que o mesmo neurónio é registado ao longo das todos os conjuntos de quadrículas adjacentes © Permanyer Portugal 2012
sessões através da análise da projecção da sua (5-20 quadrículas) com taxa média de disparo
curva do potencial de acção num plano 3D ob- superior a dois desvios-padrão em relação à taxa
tido por análise de PC. A localização espacial média global do neurónio em toda a arena .
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do animal na arena de comportamento foi moni- O tamanho de cada spatial field foi calculado so-
torizada utilizando um sistema de vídeo (Cine- mando o número de quadrículas adjacentes que
Plex, Plexon Inc., Dallas, TX, EUA). Este sistema partilham o critério anterior.
permitiu a sincronização do comportamento em Em termos de propriedades básicas de dispa-
vídeo com os sinais neuronais adquiridos. ro foram calculados os seguintes parâmetros:
– Taxa média de disparo na arena de com-
Análise dos dados portamento.
Os sinais neuronais foram pré-processados – Taxa média de disparo dentro do spatial field.
– Pico máximo de disparo dentro do spatial
utilizado o software NeuroExplorer 4 (NEX, Ple- field.
xon Inc., Dallas, TX, EUA) e exportados para – Índice de capacidade de discriminação es-
ambiente MatLab para a utilização de rotinas pacial, razão entre a taxa média de disparo
desenhadas para análises complementares (Ma- dentro e fora do spatial field.
thWorks, Natick, MA, EUA). As comparações – A coerência de disparo dentro do spatial
estatísticas dos grupos experimentais foram field, que correspondente à autocorrelação
efectuadas por análise de variância (Repeated entre a taxa de disparo de cada quadrícula
Measures – análise de variância [ANOVA], dois do spatial field e a taxa média em todas as
factores) e sempre que apropriado foi aplicado quadrículas da arena comportamental (Neu-
um teste post hoc do tipo Bonferroni (Prism 5.0, roExplorer, Plexon Inc., Dallas, TX, EUA).
GraphPad, San Diego, CA, EUA). O nível de sig- A actividade espacial das células foi caracte-
nificância foi fixado em 5%. Os resultados são rizada utilizando o índice de informação espacial
expressos como média e erro-padrão da média. (I, especificidade) 48,49 . A especificidade ou índice
de informação espacial de cada place cell foi
Classificação das células calculado em termos de quantidade de informa-
Foram classificados como potenciais place ção espacial (em bits) que cada disparo singular
cells todos os neurónios com um pico na curva consegue aportar acerca da localização do ani-
de potencial de acção com duração superior a mal, sendo determinado pela seguinte equação: Sem o consentimento prévio por escrito do editor, não se pode reproduzir nem fotocopiar nenhuma parte desta publicação.
450 μseg e razão sinal/ruído superior a 3:1. Este I = Σ P (R / R).log (R / R), onde i corresponde
i
i
2
i
tipo de células é caracterizado por possuir dis- ao número de quadrículas de resolução, P é a
i
paros complexos, sendo que a célula pode con- probabilidade de ocupação da quadricula i, R i
ter entre dois a cinco disparos com um ISI de é a taxa média de disparo na quadrícula i, e R é
aproximadamente 5 mseg. Os disparos comple- a taxa global média de disparo da célula. Um
xos foram identificados pela função de autocor- valor igual a 0 indica que a célula não codifica
relação do software Neuroexplorer (NEX, Plexon informação espacial, enquanto no caso de se
Inc., Dallas, TX, EUA), que calcula o intervalo tratar de uma place cell o seu valor poderá ser
entre todos os pares de disparos, permitindo igual a um ou superior.
distinguir os padrões de disparo das place cells A posição média de cada spatial field na
dos das células θ (interneurónios putativos) . tarefa comportamental foi calculada pelo centro
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Os dados referentes às células θ não foram in- de massa (centróide) da distribuição da taxa de
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cluídos neste estudo. As place cells apresentam disparo dentro do spatial field . Para avaliar
uma frequência média de disparo típica inferior mecanismos de expansão dos spatial fields, foi
a 5 Hz e dentro do spatial field inferior a 30 Hz. calculado o tamanho médio (em quadrículas)
Devido ao facto da maior parte dos parâmetros de cada spatial field. Para avaliar oscilações de
analisados ser afectado por taxas de disparo posição, foi calculada a distância euclidiana (em
muito baixas, todas as células que apresentaram píxeis) dos centróides de cada spatial field entre
uma taxa média inferior a 0,1 Hz não foram ana- as sessões de registo.
lisadas.
Histologia
Propriedades de disparo No final das experiências, os ratos foram anes-
DOR ram preparados dividindo o meio ambiente de tesiados com uma mistura de cetamina/xilazina
Os mapas de disparo de cada neurónio fo-
e os locais de registo marcados por injecção de
28 teste numa matriz de 32 por 32 quadrículas, corrente (10-20 μA durante 10-20 seg) através