Page 28 Volume 20 - N2 - 2012

H. Cardoso-Cruz, et al.: Neuropatia periférica induz instabilidade na codificação de informação espacial pelas place cells da área CA1

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OpenControl adaptado para esta tarefa particular . afastado de forma a expor a superfície do osso
Durante o período de treino, cada rato recebeu por que foi limpo com peróxido de hidrogénio. Após
dia duas sessões de 15 min para aprender a esse passo, foram abertos orifícios para a colo-
tarefa. Foi estabelecido um critério de pelo me- cação de quatro parafusos para a posterior sus-
nos 80 alternações correctas a obter num período tentação da matriz de eléctrodos. Para inserção
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de quatro dias consecutivos . Após cada animal da matriz de eléctrodos foi feita uma craniotomia
alcançar esse critério, foram sujeitos a uma cirur- expondo uma área de 3 x 3 mm. © Permanyer Portugal 2012
gia para implantação unilateral de uma matriz de Cada matriz de eléctrodos transporta oito fi-
eléctrodos para o registo da actividade neuronal lamentos de tungsténio revestidos com isonel
(ver detalhes a seguir). (35 µm diâmetro) (California Fine Wire Company,
Após sete dias de recobro da cirurgia de im- Grover Beach, CA, EUA), com uma impedância
plantação, os 12 ratos (n = 6 grupo controlo e entre 0,5 e 0,7 MΩ a 1 kHz. As matrizes foram
n = 6 grupo SNI) foram registados durante qua- construídas numa arquitectura de 4 x 2, com um
tro dias consecutivos (a seguir denominado por espaçamento entre linhas de 250 μm e entre
período controlo) enquanto executavam a tarefa colunas de 400 μm . As matrizes de eléctrodos
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comportamental de alternação (duas sessões foram orientadas rostro-caudalmente e monta-
diárias de 15 min cada). No dia subsequente das num microposicionador hidráulico (FHC Inc.,
os animais foram anestesiados e submetidos ao Bowdoin, ME, EUA) e após remoção da dura-
modelo de dor neuropática (SNI) ou à interven- máter conduzidas lentamente (50 µm/min) até à
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ção de controlo que consistiu numa incisão na área CA1 do hipocampo, monitorizando simulta-
pele e dissecção de músculo com a mesma neamente a actividade neuronal. Foram utilizadas
extensão do modelo SNI, embora deixando o as seguintes coordenadas em milímetros relativas
nervo intacto. Ambas as intervenções foram re- ao bregma para centrar as matrizes de eléctro-
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alizadas na pata posterior contralateral à locali- dos: –3,2 rostro-caudal, +2,2 médio-lateral e
zação intracraniana dos eléctrodos de registo. –2,6 dorso-ventral. Depois de os eléctrodos atin-
Os dois grupos de animais foram registados girem a sua posição final, a craniotomia foi selada
durante um período de três semanas (com re- com uma camada de agar (4% em solução sali-
gistos efectuados nos dias 1, 2, 3, 7, 10, 15 e na) e a matriz fixa ao crânio utilizando cimento
21 após a cirurgia SNI ou de controlo). O nível de dental acrílico. No final da cirurgia o animal foi
sensibilidade à estimulação dolorosa foi avaliado transferido para uma caixa de recobro e foi ad-
com uma escala de filamentos von Frey (Somedic, ministrada uma dose do analgésico carprofeno
Suécia) seguindo a metodologia descrita . (7,5 mg/kg) (Rimadyl , Pfizer Animal Health, Lisboa,
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®
Portugal) e do antibiótico amoxicilina (6,0 mg/kg)
®
Implantação intracraniana dos eléctrodos (Clamoxyl , Pfizer Animal Health, Lisboa, Portu-
gal) subcutaneamente a cada 24 horas durante
Para a implantação intracraniana das matrizes os três primeiros dias após a cirurgia. Os ratos
de eléctrodos, os animais foram anestesiados foram deixados em recobro durante um período
com mistura de cetamina e xilazina administrada de uma semana até voltarem a iniciar as sessões Sem o consentimento prévio por escrito do editor, não se pode reproduzir nem fotocopiar nenhuma parte desta publicação.
por via intramuscular (10 e 60 mg/kg, respecti- de treino na tarefa comportamental.
vamente). O nível de anestesia foi mantido com
administração de pequenas quantidades de
cetamina (1/3 da dose de indução). Durante o Registo da actividade neuronal
procedimento foi fornecido oxigénio através de A actividade neuronal registada a partir dos
uma mascara facial. O nível de profundidade da eléctrodos implantados foi processada utili-
anestesia e parálise muscular foi regularmente zando um sistema Multineuron Acquisition Pro-
verificado testando os reflexos musculares e mo- cessor (16-MAP, Plexon Inc., Dallas, TX, EUA).
vimentos da córnea. Após a indução da aneste- A identificação das curvas dos potenciais de
sia, a cada animal foi administrada uma dose acção dos neurónios foi efectuada utilizando ja-
subcutânea de sulfato de atropina (0,02 mg/kg) nelas de selecção com delimitação de voltagem
e 1 ml de soro subcutâneo (sacarose a 2% p/v e tempo. Os sinais neuronais diferenciados fo-
em NaCl a 0,9 p/v) a cada 60 min. A tempera- ram pré-amplificados (10.000-25.000x) e digita-
tura corporal foi monitorizada com um termóme- lizados a 40 kHz. Cada canal de registo permitiu
o
tro rectal e mantida a 37 C através da utilização a identificação de um ou dois potenciais de ac-
de um tapete homeotérmico. A cabeça do ani- ção diferentes em tempo-real (SortClient 2008,
mal foi rapada e limpa utilizando uma aplica- Plexon Inc., Dallas, TX, EUA), validados poste-
ção tripla de álcool (70% v/v) e Betadine . Foi riormente por análise em offline (Offline Sorter,
®
administrado subcutaneamente a nível medial Plexon Inc., Dallas, TX, EUA) de acordo com os
do couro cabeludo 0,3 ml de lidocaína a 1% seguintes critérios acumulativos: oscilação em
(B Braun, Melsungen, Alemanha) com o objecti- voltagem superior a dois desvios-padrão da am-
vo de induzir analgesia local. Os animais anes- plitude média do sinal, razão sinal/ruído superior
tesiados foram fixados num aparelho estereotá- a 2,5x, menos de 1% dos disparos com intervalo DOR
xico utilizando barras interauriculares, e foi feita interdisparo (ISI) inferior a 1,5 mseg, e estabilida-
uma incisão rostro-caudal. O tecido conectivo foi de da curva do potencial de acção determinada 27