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Dor (2002) 10
Materiais e métodos de pressão dolorosa com pinça cirúrgica. Esta sequên-
cia de estimulação foi repetida cada 20 min, três vezes
Foram utilizados 25 ratos machos adultos (250-300 g) antes lesão periférica (constrição do nervo ciático ou
da estirpe Sprague-Dawley. Todos os protocolos foram injecção subcutânea de formol – registos fisiológicos de
aprovados pelo Committee for the Humane Use of controlo), e por um período variável, nunca inferior a 3
Animals da Upstate Medical University (Syracuse, NY, h, após a lesão periférica. Pelas respectivas respostas
USA) e estão de acordo com os Guidelines for the Use aos três tipos de estimulação (toque, pressão não dolo-
of Animals in the Study of Pain (IASP Press). Foram rosa e pressão dolorosa), os neurónios somatossensiti-
usados dois tipos de anestesia: halotano, nos registos vos registados foram classificados como sendo de bai-
do tálamo lateral (indução: 4% halotano numa mistura xo limiar (não-nociceptivos; respondem a estímulos
de 70% O e 30% NO ; manutenção: 0,5-1,2% halotano inócuos, adaptam à pressão e respondem desconti-
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na mesma mistura gasosa), e uretano (1,25 g/kg i.p., nuadamente a estímulos dolorosos), de largo-espectro
com suplementos de um quarto da dose dados com dinâmico (respondem a estimulação inócua e nóxica de
intervalos de 120 min), nos registos espinais. Após a forma proporcional à intensidade do estímulo), ou noci-
anestesia os animais foram colocados no aparelho de ceptivos-específicos (respondem apenas à estimulação
estereotaxia. A craniotomia contralateral ou laminecto- dolorosa). As respostas à estimulação foram validadas
mia ipsilateral, segundo o local de registo, foi realizada por comparação estatística da frequência de actividade
sobre a região somatotópica de representação da pata instantânea (número de potenciais de acção por segun-
posterior esquerda. do) antes e durante a aplicação do estímulo cutâneo
Foram utilizados dois protocolos de indução de dor (considerada como positiva a resposta que ultrapassas-
persistente. Nos registos talâmicos utilizou-se o modelo se um valor superior ao dobro da variância da frequên-
da Constrição Parcial do Nervo Ciático (partial sciatic cia observada no período de 30 s anterior ao início do
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ligation – PSL ), e nos registos das populações espi- período de estimulação).
nais foi utilizado o modelo da injecção subcutânea de No fim da experiência e ainda sob o efeito da anes-
formol diluído 18,19 . No caso do modelo PSL, antes do tesia, os animais foram perfundidos intracardiacamente
início do registo fisiológico o nervo ciático foi exposto e com paraformaldeído a 4%. A região de registo (tálamo
atravessado por uma linha de sutura cirúrgica (7,0 nilon). ou medula espinal) foi seccionada em cortes transver-
A linha foi preparada com um nó corrediço deixado sais de 50 µm de espessura corados com violeta-cresil
frouxo, e as pontas da linha exteriorizadas pela incisão ou formol-tionina por forma a identificar o percurso e
cutânea. Este procedimento permitiu que se proce- local de registo dos eléctrodos.
desse de forma não invasiva à constrição da porção
dorsal do nervo ciático incluída dentro do nó corrediço, Resultados
já após a conclusão dos registos fisiológicos de controlo. Foram considerados para análise apenas os neuró-
No caso do modelo do formol, após o termo dos
registos fisiológicos de controlo, injectou-se subcutanea- nios que apresentaram estabilidade nas suas proprieda-
mente 50 µl de formol a 5%. des de resposta durante o período de 60 min de registo
electrofisiológico que precedeu sempre a lesão perifé-
A actividade neuronal foi registada extracelularmente rica (constrição parcial do nervo ciático nos registos
com multieléctrodos constituídos por 4 filamentos inde- talâmicos, e injecção subcutânea de formol nos registos
pendentes de tungsténio (impedância: 2-5 MOhm) es-
paçados a 150 µm (registos talâmicos) ou 240 µm espinais). Foram registadas 5 populações neuronais no
(registos espinais). As diferentes distâncias intereléctro- tálamo lateral (um total de 32 neurónios, 5,6 ± 2,1 por
registo), e 8 populações espinais (um total de 54 neu-
dos escolhidas estão relacionadas com a diferente rónios, 6,75 ± 0,45 por registo). Foram ainda registadas
densidade neuronal entre o tálamo lateral e o corno duas populações controlo no tálamo (7 neurónios), e
dorsal da medula espinal; as distâncias foram aferidas
de forma a maximizar o número de neurónios vizinhos três na medula espinal (14 neurónios); nestas popula-
obtidos em cada experiência. ções controlo os registos prolongaram-se por 180 min,
não se tendo efectuado qualquer lesão periférica.
Os sinais da actividade multineuronal foram amplifi-
cados e digitalizados em tempo real (DataWave Tech- Plasticidade das Populações Talâmicas
nologies, Longmont CO, USA), e a separação e identi-
ficação de neurónios independentes a partir dos As respostas neuronais anteriores à constrição parcial
registos multiunit foi feita por métodos computacionais do nervo ciático foram comparadas com as respostas
tendo por base o perfil individual dos potenciais de obtidas 180 e, quando possível, 360 min após a lesão.
acção correspondentes a cada neurónio (Offline Sorter, A figura 1 apresenta os gráficos das respostas de 6
Plexon Inc., Dallas TX, USA). A resposta dos neurónios neurónios talâmicos registados simultaneamente, à es-
aos estímulos aplicados foi avaliada por histogramas timulação periférica dolorosa aplicada em 3 pontos
periestímulo, e a conectividade funcional entre cada par distintos, antes e depois da constrição do nervo ciático.
de neurónios registados simultaneamente foi avaliada Após a lesão periférica, 28 dos 32 neurónios regista-
pela correlação-cruzada dos tempos de ocorrência dos dos no tálamo (88%) sofreram alterações na extensão
respectivos potenciais de acção (Neuroexplorer, Plexon ou posição do seu campo receptivo (definido como a
Inc., Dallas, TX, USA). área corporal cuja estimulação suscita uma resposta
Cada período de estimulação consistiu em 60 s de fisiológica neuronal), e/ou no limiar de excitabilidade
DOR toques cutâneos com pincel fino (estimulação mecânica dos neurónios. No período controlo anterior à constrição
não dolorosa), 30 s de intervalo, 30 s de pressão não
11 dos 32 neurónios eram do tipo LT, 7 eram WDR, 8
20 dolorosa com pinça cirúrgica, 30 s de intervalo, e 30 s eram NS e 6 não possuíam campo receptivo identificá-