Page 42 Volume 17 - N.3 - 2009

B. Frias, et al.: O Bloqueio Intratecal de Factor de Crescimento Nervoso Diminui a Dor Referida e a Hiperactividade Vesical em Animais com Cistite
anti-coelho foi adquirido à Dakopatts A/5 (Cope- injectados com CYP. Às 4, 24 e 48 h após injec-
nhaga, Dinamarca). O kit complexo avidina-bio- ção de CYP, os animais receberam injecções
tina (ABC) Vectastain Elite e o anticorpo anti-co- intratecais de soro ou TrkA-Ig2 (1 e 10 µg). Após
elho conjugado com a peroxidase de hidrogénio 15 minutos, o limiar de sensibilidade da região
foram comprados a Vector Laboratories (Peter- abdominal e da pata traseira direita foi determi-
borough, Reino Unido). Os anticorpos e o com- nado.
plexo ABC foram preparados em tampão fosfato
salino 0,1 M (PBS) contendo 0,3% de triton X-100 Cistometrias
tampão fosfato salino com triton (PBST). O efeito da sequestração de neurotrofinas na
actividade reflexa da bexiga foi estudado em
Cirurgias animais submetidos anteriormente a um proce-
Seis grupos de ratos fêmeas (n = 4 de animais dimento cirúrgico para a colocação de um cate-
por grupo experimental) foram submetidos a um ter de silicone intratecal e sujeitos a administra-
procedimento cirúrgico para a colocação de ção de CYP. Para a realização de cistometrias,
um cateter de silicone (SF Medical, Hudson, MA, as bexigas foram expostas através de uma inci-
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EUA) de acordo com Bennett, et al. e Kerr, et al. . são na região abdominal inferior e uma agulha
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Os cateteres foram colocados no espaço suba- de 21-gauge foi colocada na região da cúpula
racnóide lombar a nível L5/L6 da medula espinal. da bexiga, após o qual cessaram as manipula-
Para isso, realizou-se uma laminectomia entre as ções dos animais durante 15 minutos para per-
vértebras T9 e T10 e, posteriormente, a dura foi mitir a estabilização da bexiga. Soro fisiológico
rompida. O cateter foi inserido sob a membrana foi injectado pela agulha a uma velocidade
subaracnóide e empurrado até a ponta chegar constante de 6 ml/h enquanto as contracções da
ao segmento L5-L6 da medula espinal. A outra bexiga foram registadas por um transdutor de
ponta do cateter foi externalizada para injecção pressão (World precisión instruments [WPI]) li-
de soro fisiológico ou TrkA-Ig2 e selada até à gado a um computador. A temperatura corporal
o
próxima manipulação. Os animais foram deixados foi mantida a 36-37 C com um cobertor térmico.
quatro dias a recuperar da cirurgia e durante A uretra foi mantida desobstruída ao longo da
esse período foram cuidadosamente monitori- experiência para que a solução salina pudesse
zados. ser expelida pelas contracções da bexiga. Após
a estabilização da bexiga, iniciou-se a injecção
Alodinia Mecânica: teste Von Frey da solução salina e registou-se o reflexo de ac-
A alodinia mecânica na região abdominal e na tividade da bexiga durante 30 minutos aproxima-
damente. Posteriormente, injectaram-se 25 µl de
pata traseira direita foi determinada para cada soro por via intratecal e o reflexo da actividade
grupo de animais antes e após a indução da de bexiga foi avaliada durante mais 30 minutos.
inflamação da bexiga. O limiar de sensibilidade Um grupo de animais foi injectado com 1 e 10 µg
a estímulos mecânicos foi estabelecido com os de TrkA-Ig2, respectivamente aos 60 e 90 minu-
monofilamentos de Von Frey usando o método tos após o início do registo. No final da experi-
up-down. Os animais foram colocados em câ- ência, os animais foram perfundidos e verificou-
maras individuais (23 x 17 x 14 cm) sob uma se a posição do cateter. Os cistometrogramas
rede de arame e deixados a adaptar-se durante obtidos foram analisados utilizando o software
15 minutos ou até que a exploração da câmara DataTrax (Vs. 1.804, WPI) e a frequência de con-
terminasse. A região abdominal inferior e a pata tracção da bexiga foi determinada nas diferentes
traseira direita foram tocadas com uma série de fases da experiência, contando o número de picos
oito monofilamentos Von Frey (avaliados em 2, com amplitude igual ou superior a 5 cm H O.
4, 6, 8, 15, 26, 60, 100 g). Os filamentos foram 2
aplicados durante cinco segundos perpendicu- Perfusão e imunocitoquímica
larmente à superfície plantar com força suficiente
para que o filamento se curvasse ligeiramente. Após a avaliação comportamental ou o registo
Cada filamento foi testado quatro vezes, com um da função vesical, todos os animais foram per-
intervalo de 30 segundos entre os filamentos. Os fundidos através da aorta com solução de Tyro-
testes foram iniciados com o filamento de 2 g, de oxigenada sem cálcio (0,12 M NaCl, 5,4 mM
.
.
tendo os restantes filamentos sido aplicados de KCl, 1,6 mM, MgCl 6H O, 0,4 mM MgSO 7H O,
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igual modo sucessivamente. Em caso de ausência 1,2 mM NaH PO .H O, 5,5 mM glucose, 26,2 mM
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de resposta ao filamento, aplica-se o filamento NaHCO ) seguido de paraformaldeído a 4%. No
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sucessivo mais espesso até a obtenção de uma caso dos animais em que se avaliou a sensibili-
resposta positiva, que se traduz quando um animal dade cutânea, colheram-se os segmentos L5 e
retira ou lambe a pata ou salta. L6 da medula espinal que foram pós-fixados
A habituação às condições de teste foi reali- durante 4 h e criopreservados durante 24 h
zada durante três dias, no final das quais o em sacarose a 30% com 0,1% de azida sódica em
limiar de sensibilidade a estímulos mecânicos 0,1 M de tampão fosfato. As secções transversas DOR
da região abdominal e da pata traseira direita foi de 40 µm de segmentos L5 da medula espinal
determinado. Os animais foram posteriormente foram cortadas num micrótomo de congelação 41