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e guardadas numa solução de crioprotecção a mantendo-se por valores semelhantes nos res-
–20 C até serem imunoreagidas contra a prote- tantes tempos da experiência. Assim, os valores
o
ína c-Fos e visualizadas pelo método ABC. Após para o LM observados às 24 e 48 h após injecção
inibição da actividade endógena da peroxidase de CYP foram, respectivamente, 10,2 ± 5,6 g e
e lavagens em PBS e PBST, as secções foram 9,8 ± 6,2 g (p < 0,05) (Figs. 1 A e B).
incubadas em soro normal de porco a 10% em Na pata traseira direita, o LSM basal registado
PBST durante duas horas. Posteriormente, foram foi também de 26,0 ± 0,0 g. Quatro horas após
incubadas durante 48 h a 4 C com um anticor- indução de inflamação e injecção de soro por
o
po específico contra c-Fos (1:5.000). As sec- via intratecal, o LSM diminuiu ligeiramente para
ções foram depois lavadas e incubadas com um 22,3 ± 6,4 g. No entanto, às 24 e 48 h após in-
anticorpo policlonal de porco anti-coelho biotini- dução de cistite, o LSM diminuiu significativa-
lado (1:200). Para imunodetecção, o método mente para 8,2 ± 2,0 g e 8,7 ± 3,2 g (p < 0,001)
ABC conjugado com peroxidase (1:200) foi utili- (Figs. 1 A e B), respectivamente.
zado com 3, 3′-diaminobenzidina tetra-hidroclo-
rido como cromogéneo (– 3,3’-diaminobenzidina Sensibilidade mecânica após injecção intratecal
[DAB]; 5 min em 0,05 M tampão Tris, pH 7,4 de tyrosine receptor kinase A-immunoglobulin 2
contendo 0,05% DAB e 0,003% peróxido de hi-
drogénio). Os cortes foram montados em lâminas No grupo de animais inflamados com CYP que
cobertas com gelatina e secos durante 12 h, foram tratados com 1 µg de TrkA-Ig2, antes da
limpos em xilol, montadas com meio de monta- indução da inflamação da bexiga, o LSM da re-
gem Eukit e cobertos com uma lamela. gião abdominal foi de 30,6 ± 11 g. Os valores do
LSM às 4, 24 e 48 h e 15 minutos após injecção
intratecal de 1 µg de TrkA-Ig2 foram, respectiva-
Quantificação e estatística mente, 53,2 ± 15 g, 53,2 ± 15 g (p < 0,001
Todos os dados da avaliação comportamental versus animais inflamados com CYP tratados
foram analisados com o teste análises de vari- com soro) e 27,0 ± 20 g (p < 0,05 versus animais
ância univariada (ANOVA) one-way repeated inflamados com CYP tratados com soro) (Figs. 1 A
measures, seguido do teste post-hoc Student- e B). Resultados semelhantes foram observados
Newman-Keuls utilizando o software SigmaStat nos animais inflamados tratados com uma injec-
3.11. Em todos os casos, um p < 0,05 foi consi- ção intratecal de 10 µg de TrkA-Ig2. O LSM
derado estatisticamente significativo. Os resulta- basal no abdómen foi de 51,5 ± 5,7 g. Às 4, 24
dos são apresentados como a média ± desvio- e 48 h após indução de inflamação e 15 minutos
padrão (DV). após administração intratecal de 10 µg de TrkA-Ig2,
Os cistometrogramas foram analisados utili- os LSM registados foram respectivamente 60,0
zando o software Data Trax (Vs. 1.804; WPI). A ± 0,0, 51,5 ± 17 g e 34,5 ± 17 g (p < 0,001
frequência de contracção da bexiga foi analisa- versus animais inflamados com CYP tratados
da com o teste ANOVA Kruskal-Wallis one-way com soro) (Figs. 1 A e B).
repeated measures utilizando o software Sig- O LSM basal da pata traseira direita dos ani-
maStat 3.11. Os resultados são apresentados mais inflamados tratados com 1 µg of TrkA-Ig2 foi
como a média ± DV e um p < 0,05 foi conside- de 21,5 ± 5,6 g. Às 4 h após injecção de CYP e
rado estatisticamente significativo. depois da injecção intratecal de 1 µg de TrkA-Ig2,
Os núcleos imunorreactivos para a proteína o LSM observado foi de 60,0 ± 0,0 g (p < 0,001
c-Fos foram contados nos cornos dorsais (DH), versus animais inflamados com CYP tratados com
na comissura dorsal (DCM) e nas áreas intermé- soro) (Figs. 1 A e B). Às 24 e 48 h após indução
dio-laterais de matéria cinzenta da medula (ILG) de inflamação e administração de 1 µg de TrkA-Ig2,
em 10 secções não contínuas da medula espi- os LSM observados foram respectivamente
nal. A análise estatística foi realizada utilizando 42,0 ± 0,0 g e 14,4 ± 11 g (Figs. 1 A e B).
a ANOVA one-way no software SigmaStat 3.11. O LSM basal da pata do grupo de animais in-
Os resultados são apresentados como o número flamados que receberam 10 µg do TrkA-Ig2 foi de
médio de células por secção da medula espinal 34,5 ± 5,7 g. Após 4 h de inflamação e injecção
± DV e p < 0,05 foi considerado estatisticamente intratecal de 10 µg of TrkA-Ig2, verificou-se um
significativo. aumento do LM (60,0 ± 0,0 g). Resultados seme-
lhantes foram observados às 24 e 48 h após injec-
Resultados ção de CYP e tratamento intratecal com TrkA-Ig2.
Assim, os LSM nestes tempos da experiência
Sensibilidade mecânica após injecção foram respectivamente 51,7 ± 17 g e 40,3 ± 23 g
intratecal de soro (p < 0,001 versus animais inflamados com CYP
Antes da indução de cistite, o limiar de sensi- tratados com soro) (Figs. 1 A e B).
bilidade mecânica (LSM) da região abdominal
inferior foi de 26,0 ± 0,0 g. No entanto, quatro Expressão de c-Fos na medula espinal após
injecção de soro e 1 e 10 µg TrkA-Ig2
DOR horas após a injecção de CYP e 15 minutos após Em cortes da medula espinal de animais
injecção intratecal de soro, o LSM diminuiu sig-
42 nificativamente para 8,5 ± 2,6 g (p < 0,05), inflamados com CYP tratados com soro foram