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F. Lourenço Moreira Neto, J.M. Castro-Lopes: Envolvimento dos Receptores Metabotrópicos do Glutamato na Dor Crónica: Estudo Experimental
e 3) e III (mGluR4, 6, 7 e 8) estão acoplados negativamente proceder à hibridização simultânea para os oito subtipos de
à adenil ciclase, baixando os níveis intracelulares de mono- mGluR actualmente conhecidos em cada um dos núcleos
fosfato de adenosina cíclico (AMPc) 25,30,34 . Dentro do grupo talâmicos de um único animal, até porque experiências pre-
III, o mGluR6, que se encontra exclusivamente em células liminares demonstraram haver diferenças rostrocaudais na
da retina, também se acopla a uma fosfodiesterase que expressão de alguns mGluR em cada núcleo individualmente.
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degrada o monofosfato de guanosina cíclico (GMPc) . A Assim, na primeira parte deste trabalho foi analisada a ex-
activação de segundos mensageiros induz uma série de pressão do ARNm para os subtipos mGluR1, 3, 4, 5 e 7, em
mecanismos intracelulares modulando a actividade de ca- cortes transversais do tálamo do rato a diferentes níveis
nais iónicos e, portanto, as conductâncias iónicas das mem- rostrocaudais, usando hibridização in situ com sondas de
branas e as propriedades electrofisiológicas dos neuró- oligonucleótidos específicas para cada subtipo.
nios 29,34,35 . Uma vez que diferentes subtipos de receptores têm A injecção intra-articular de adjuvante completo de Freund’s
diferentes mecanismos de actuação, os efeitos da neuro- (CFA) na articulação tibiotársica do rato provoca uma monoar-
transmissão glutamatérgica são determinados pela compo- trite inflamatória crónica estável . Os animais monoartríticos
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sição dos vários subtipos de receptores no local de sinapse. revelam hiperalgesia e alodínia em poucos dias e adoptam um
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Tem sido demonstrado que a activação de mGluR afecta comportamento de defesa da pata afectada . Para medição
a excitação neuronial a vários níveis, estando relacionada da alodínia nestes animais é comum utilizar-se um teste noci-
com o desenvolvimento cerebral e a plasticidade sináptica, ceptivo padrão denominado “teste da flexão do tornozelo” .
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influenciando mecanismos de aprendizagem e memória e Estudos anteriores em ratos monoartríticos, usando a técnica
participando na indução de potenciação e depressão de de mapeamento por injecção de 2-deoxiglucose (2-DG), de-
longa duração (LTP e LTD, respectivamente) 25,36,37 . Além monstraram ocorrer um aumento bifásico não-linear da activi-
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disso têm sido associados com a neurotoxicidade induzida dade metabólica neuronial em regiões espinhais e supra-
pelo glutamato, com diversos estados patológicos, possuin- espinhais durante o desenvolvimento da doença, incluindo um
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do ainda noutras situações uma acção neuroprotectora 37-39 . grande número de núcleos talâmicos . Além disso, o aumento
Nos últimos anos, os mGluR têm também sido implicados na crónico do afluxo nociceptivo causa alterações prolongadas no
modulação da dor aguda e inflamatória, principalmente na funcionamento e actividade do SNC 72,73 , tais como aumento
medula espinhal 40-46 , mas também em algumas regiões do dos campos receptivos neuroniais 74-76 e sensibilização cen-
tronco cerebral como a substância cinzenta periaquedutal tral 72,76-78 . Um elevado número de neurotransmissores e siste-
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(PAG) . No tálamo, diversos estudos electrofisiológicos evi- mas modulatórios contribuem para esta plasticidade do siste-
denciaram o envolvimento dos mGluR na transmissão sináp- ma nociceptivo dependente da actividade, estando os seus
tica, actuando não só pós-sinapticamente por despolariza- níveis de expressão alterados em resposta ao afluxo nóxico
ção de neurónios de transmissão talâmicos, mas também crónico 40,72,79-82 . Assim, também neste estudo pretendeu-se ave-
pré-sinapticamente por modulação da inibição mediada pelo riguar possíveis alterações da expressão dos mGluR nos
GABA, influenciando assim o fluxo tálamo-cortico-talâmico e núcleos talâmicos de animais monoartríticos em que se tinha
a transmissão de informação sensitiva 48-54 . observado um aumento da actividade metabólica neuronial .
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A análise da distribuição específica de subtipos de mGluR Em particular, estudaram-se os níveis de expressão do ARNm
nas diferentes subregiões talâmicas pode contribuir para uma para o mGluR1, 4 e 7 nos núcleos do VB, Po, Sub e Pf do
melhor compreensão do papel das vias glutamatérgicas na tálamo, após se ter verificado serem estes mGluR os mais
actividade talâmica. Recentemente, a distribuição do ARNm abundantemente expressos nessas regiões, e para o mGluR3
para subtipos de mGluR foi estudada na SNC de ratos por no Rt, único subtipo exclusiva e abundantemente expresso
diferentes grupos, usando hibridização in situ 55-64 . Embora neste núcleo. As alterações da expressão nos ratos monoartrí-
alguns desses estudos façam uma descrição qualitativa da ticos foram estudadas a diferentes tempos de evolução da
distribuição do ARNm de certos mGluR no tálamo, a maioria doença (2, 4 e 14 dias), de modo a investigar-se se essas
deles inclui um grande número de regiões do encéfalo e não alterações também seguiriam um padrão temporal específico
dá uma atenção especial e detalhada a cada um dos núcleos tal como foi observado para as modificações da actividade
talâmicos individualmente. Além disso, esses trabalhos res- metabólica neuronial.
tringiram-se a um ou dois subtipos de mGluR por estudo, o Finalmente, no VB, os mGluR do grupo II (mGluR2 e 3)
que não permite a comparação directa da expressão do parecem actuar como receptores pré-sinápticos localizados
ARNm de múltiplos subtipos de mGluR ao mesmo tempo nos terminais de neurónios GABAérgicos que projectam do
dentro de um mesmo núcleo talâmico, especialmente porque Rt, inibindo a libertação de GABA em resposta a estímulos
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as condições intrínsecas da hibridização in situ podem variar sensitivos . No entanto, para além de um estudo recente
de cada vez que a técnica é utilizada, impedindo compara- que sugere a acção inibitória pós-sináptica dos mGluR do
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ções quantitativas rigorosas . Deste modo, no presente tra- grupo II nos neurónios do Rt , pouco se sabe acerca do
balho, foi feita uma hibridização in situ de vários subtipos de papel funcional dos subtipos de mGluR do grupo II neste
mGluR simultaneamente, em cortes adjacentes do encéfalo núcleo, particularmente após estimulação nóxica. Assim,
de ratos normais, de modo a obter-se uma descrição mais ainda no presente estudo, ratos monoartríticos foram injec-
sistemática e a comparação da distribuição quantitativa regio- tados por estereotaxia no Rt contralateral à articulação
nal do ARNm para diferentes subtipos de mGluR nos diversos inflamada, com ácido (2S)-α-etilglutâmico (EGLU), um anta-
núcleos talâmicos. Estudos anteriores demonstraram que a gonista selectivo dos mGluR do grupo II, de modo a inves-
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expressão do ARNm para o mGluR2 no tálamo é baixa , e tigar os efeitos na transmissão nociceptiva do bloqueio dos
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que o ARNm para o mGluR6 é exclusivamente expresso na mGluR3 no Rt, utilizando o “teste da flexão do tornozelo” .
retina 25,30,66 . Foi também demonstrado que o mGluR8 é muito
expresso na retina, bolbo olfactivo e nos tubérculos mamila- Materiais e métodos
res do ratinho adulto, mas tem uma expressão muito reduzida Animais
e restrita a algumas células disseminadas pelo córtex e
encéfalo posterior , embora um estudo mais recente tenha Foram utilizados ratos Wistar adultos do sexo masculino
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demonstrado haver uma expressão proeminente de ARNm (Instituto Gulbenkian de Ciência, Oeiras), pesando entre 270
para o mGluR8 no Rt lateral do tálamo de rato . Devido a e 310 g. Todos os animais foram alojados em gaiolas com
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razões metodológicas relacionadas com o número de cortes alimento e água ad libitum e mantidos a uma temperatura DOR
necessários à hibridização de cada mGluR e ao pequeno constante de 22 °C e luminosidade controlada (ciclo de 12 h
tamanho de alguns subnúcleos talâmicos, não é possível luz/12 h escuridão). Todas as experiências respeitaram os 31