Page 27 Volume 11, Número 2, 2003

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primários. Diversas modalidades de informação a coluna vertebral foi rapidamente extraída e
sensorial a este nível são codificadas pelo tipo imersa em ice-cold oxygenated artificial cere-
de fibra aferente periférica, conexão sináptica e brospinal fluid (ACSF). Na sequência de lami-
propriedades intrínsecas membranares dos neu- nectomia o segmento lombar de 5-7 mm de
rónios daquela região (Brown, 1981; Cervero, comprimento foi dissecado e colado para corte
1987). A última varia consideravelmente entre no aparelho de corte (Leica VT 1000S). As
neurónios, permitindo uma separação em vári- fatias assim preparadas foram incubadas du-
os grupos fisiológicos (Yoshimura e Jessell, rante 30-60 min em ACSF a 33 °C.
1989; Thomson, et al., 1989; López-García e
King, 1994). A estimulação intracelular dos neu- Soluções
rónios do corno dorsal espinhal permitiu distin-
guir três grupos de neurónios de acordo com O ACSF para a preparação e manutenção
as suas propriedades intrínsecas de padrão das fatias contém (em mM): NaCl 115, KCl 5,6,
celular: os tonically firing neurons (TFN) respon- CaCl 2, MgCl 1, glucose 11, NaH PO 1,
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dem com um padrão sustentado de potenciais NaHCO 25 (pH 7,4 após borbulhamento com
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de acção à injecção de correntes despolarizan- 95-5% de mistura de O -CO ). A solução da
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tes, enquanto os neurónios dos outros dois pipeta de registo usada nas experiências de
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grupos apresentam quer vários picos no início current-clamp e registo dos canais de K con-
da despolarização, adapting neurons (AN), quer tém (em mM): NaCl 6, KCl 128, MgCl 2, EGTA
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picos tardios, delayed firing neurons (DFN). A 10 e HEPES 10. O valor de pH foi ajustado para
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relevância funcional desta classificação foi ain- 7,3 com KOH (a [K ] final foi de 160,5 mM).
da reforçada pela ideia de que estes tipos Todas as substâncias utilizadas são provenien-
neuroniais recebem diferentes tipos de enerva- tes da Sigma.
ção cutânea aferente e que a resposta dos
neurónios à estimulação cutânea periférica é Registo das correntes
semelhante à sua resposta à estimulação intra- As pipetas usadas na técnica patch-clamp
celular (López-García e King, 1994). foram construídas em duas etapas a partir de
Sabe-se que os µ-opióides têm um efeito tubos de vidro de parede grossa de boro-
pós-sináptico num subgrupo de neurónios da silicato. A sua resistência após o polimento pelo
SG resultando numa robusta hiperpolarização. calor foi de 3-5 MΩ. O amplificador de patch-
Este efeito é associado a um aumento na con- clamp EPC-9 (HEKA, Lambrecht, Germany) foi
ductância membranar devido à activação de usado em todas as experiências. Em neurónios
correntes de potássio inwardly rectifying regula- submetidos a análise detalhada a resistência em
das por proteína G (GIRK) (Grudt e Williams, série medida no modo whole-cell foi de 6-20 MΩ
1994). Contudo, até agora não é claro quais os e foi compensada em pelo menos 60%. Os
tipos de neurónios da SG que são sensíveis aos potenciais de acção foram registados usando o
agonistas de opióides. Daí que, neste estudo modo rápido de current-clamp do amplificador
tenhamos tentado encontrar uma relação entre EPC-9. As input resistances dos neurónios do
a sensibilidade neuronial aos opióides e as corno dorsal da medula espinhal foram medi-
propriedades intrínsecas inerentes aos padrões das no modo voltage-clamp usando pulsos
celulares de disparo de potenciais de acção. de 10-40 mV a partir de um nível sustentado de
Os nossos dados mostram que o agonista de –80 mV. Apenas células com um potencial de
receptores para µ-opióides (DAMGO) afecta repouso mais negativo do que –65 mV foram
especificamente os TFN, sugerindo uma coex- incluídas neste estudo.
pressão destes receptores e dos canais GIRK
apenas neste tipo de neurónios. As nossas Resultados e discussão
observações poderão assim contribuir para a
elucidação do processo de antinocicepção ine- Os três tipos distintos de neurónios foram
rente ao mecanismo endógeno descendente caracterizados nas experiências mostradas na
modulado por encefalinas. figura 1. Os TFN responderam com um padrão
de disparo tónico após injecção de pulsos de
Materiais e métodos corrente despolarizante. O número de potenciais
Preparação de acção gerados aumentou proporcionalmente
com a força estimuladora. Os AN dispararam
As experiências foram realizadas aplicando apenas vários picos de potenciais de acção
a técnica patch-clamp (Hamill, et al., 1981) a (4-6) no início de uma despolarização. Os DFN
fatias transversais de 300 µm preparadas a par- precisaram de correntes muito maiores para a
tir da região lombar da medula espinhal de geração dos primeiros picos de potenciais de
ratos de 2-5 semanas de idade (Edwards, et al., acção, os quais usualmente apareceram com
1989; Chery, et al., 2000). Os animais foram atraso ao fim de 500 ms de despolarização. À
DOR sacrificados de acordo com os protocolos le- medida que a intensidade de estimulação au-
mentou, o início do disparo dos potenciais
gais vigentes. Após a anestesia, por injecção
26 intraperitoneal de Na -pentobarbital (30 mg/kg) deslocou-se em direcção ao início do pulso
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