Page 31 Volume 12, Número 4, 2004

Dor (2004) 12
estímulo (NR, non-responsive) (Chung, 1986). Resultados
Os neurónios WDR respondiam a todos os es- Os resultados a seguir apresentados estão
tímulos, os LT respondiam mais vigorosamente baseados no registo de 267 neurónios (19,0 ± 5,54
à estimulação táctil, enquanto aos neurónios neurónios por experiência) na medula espinhal
NS respondiam exclusivamente à estimulação ao nível T13-L4, com um deslocamento dorso-
nóxica. Após a caracterização naive das res- ventral variando 300-700 µm, sendo a localiza-
postas das células, foi administrado no local de ção estimada dos neurónios entre as lâminas
inserção da matriz de eléctrodos de registo com III e V.
uma seringa de Hamilton 100 nmol de estricnina Após 5-10 min do início da aplicação da es-
(2 µl) (Sigma Chemicals) na superfície da medu- tricnina, um número significativo de neurónios
la espinhal. As respostas à estimulação foram apresentou sinais de hiperexcitabilidade: um au-
avaliadas cada 15 min até um total de 3 h. Todas mento da actividade espontânea (151 células)
as soluções utilizadas foram preparadas no pe- ou um aumento das respostas à estimulação
ríodo prévio ao início da experiência. A dissolu- táctil e/ou nóxica (116 células). Cento e cator-
ção das substâncias foi feita em solução artificial ze neurónios alteraram o seu padrão de acti-
cerebroespinhal (ACSF) (151,1 mM Na , 2,6 mM vidade, ficando silenciosos, deixando ou pas-
+
2+
2+
+
K , 0,9 mM Mg , 1,3 mM Ca , 122,7 mM Cl , sando a responder à estimulação. No conjunto
–
–
21,0 mM HCO , 2,5 mM HPO 4 2– , 3,5 mM dextro- dessas células, 43 neurónios iniciaram activida-
se, pH = 7,4). No final de cada experiência, o de, 20 tornaram-se silenciosos, 2 deixaram de
local de registo foi assinalado através da injec- responder à estimulação, 15 passaram a res-
ção de corrente DC (1,19 mA durante 30 s) atra- ponder à estimulação e 34 neurónios alteraram
vés de um dos filamentos de tungsténio. A me- o seu tipo de resposta ao estímulo depois da
dula foi posteriormente removida e armazenada estricnina. A maioria dos neurónios com respos-
em solução de paraformaldeído a 4% (v/v) duran- tas tácteis precisas seleccionados para a deter-
te 5 dias, e depois transferida para soluções de minação do tempo de latência de resposta (TLR)
sacarose de concentrações crescentes 10-30% ao estímulo inócuo apresentaram uma diminui-
(p/v) até ao momento de seccionamento em fa- ção da sua latência (27 células em 69).
tias de 50 µm. Os cortes foram montados em
lâminas e corados com tionina para identifica-
ção histológica do local de registo ao microscó- Actividade espontânea
pio óptico. A aplicação de estricnina na maioria dos neu-
Para a determinação do tempo de latência de rónios elevou a linha base de actividade que,
resposta (TLR) foi utilizado um gerador de TTL por volta dos 45-60 min, retornou ao nível inicial
(Master-8, A.M.P.I, Israel). Este gerador de TTL foi do período controlo. Todavia, é de assinalar tam-
responsável pelo envio de um sinal com dura- bém o facto de existirem células que sofrem
ção precisa (5 volts, 0,5 Hz) ao estimulador ro- alterações na sua taxa de disparo mas não vol-
bótico com a finalidade de iniciar a sua acti- tam a recuperar o nível inicial. Na figura 1 estão
vidade e outro em simultâneo ao sistema de representadas algumas alterações típicas indu-
registo da actividade neuronal, correspondendo zidas pela estricnina na actividade espontânea
o TLR ao intervalo de tempo entre a aplicação de células em animais diferentes. Neste estu-
do estímulo táctil no campo receptivo de um do, após aplicação de estricnina, 86 células
neurónio e a resposta do mesmo. A actividade (Fig. 1A-B) apresentaram um aumento da acti-
neuronal foi registada com um processador de vidade espontânea (das quais apenas 64 reto-
aquisição multicanal (MAP, Plexon Inc, Dallas, maram o nível inicial), 56 células (Fig. 1C-D) uma
Texas) e analisada em off-line através de histo- diminuição (das quais apenas 25 retomaram o
gramas de actividade (PSTH, peristimulus rate nível inicial) e 137 células não apresentaram
histograms) gerados a partir do software Neu- qualquer alteração (Fig. 1F).
roexplorer (Nex Technologies, versão 2). As O aumento da actividade espontânea das cé-
análises complementares foram desenvolvidas lulas teve início entre os 2-5 min após aplicação,
em Matlab (Release 12.1, MathWorks, Inc). A tendo atingido um pico de actividade máxima
resposta de cada neurónio à estimulação me- cerca dos 15 min, permanecendo constante du-
cânica foi quantificada e expressa em impulsos rante cerca de 30 min, tendendo a decrescer
por segundo (Hz). A significância estatística gradualmente após 45-60 min do início da apli-
entre os períodos de estimulação e espontâneo cação (Fig. 1A). Uma hora após a aplicação da
foi avaliada através do teste de análise variân- estricnina na maioria das células o nível da ac-
cia two-way (ANOVA) do tipo Kolmogorov-Smir- tividade espontânea é comparável ao período
nov. Foi considerado existir significância para controlo (pré-aplicação). Por outro lado, o grupo
p < 0,05. Os resultados são apresentados como de células que evidenciaram uma redução e/ou
média ± desvio padrão. Este estudo seguiu as silenciamento da actividade espontânea após
linhas éticas para a experimentação em ani- estricnina, nestas 16 apresentaram uma diminui-
DOR mais impostas pela Directiva da Comunidade ção pelos 2 min, em outras a diminuição foi mais
gradual, não existindo um comportamento pa-
Europeia n. 86/609/EEC, de 24 de Novembro
o
30 de 1986. drão (40 células). Também neste grupo, algu-